Email this article Method for quantitative determination of the amount of flavonoids in the leaves of Populus tremula L.
- Authors: Ushakova E.M.1, Kurkin V.A.2, Ryzhov V.M.2
-
Affiliations:
- Самарский государственный медицинский университет
- Samara State Medical University
- Section: Original Studies
- URL: https://aspvestnik.ru/2410-3764/article/view/701846
- DOI: https://doi.org/10.35693/AVP701846
- ID: 701846
Cite item
Full Text
Abstract
Аim development of a method for quantitative determination of the sum of flavonoids in leaves of Populus tremula L.
Materials and methods. The leaves of trembling poplar (Populus tremula L., Willows - Salicaceae), harvested on the territory of the Botanical Garden of Samara University and on the territory of the village of Alekseevka in the Samara Region in June-September 2025. Direct and differential spectrophotometry were used as study methods.
Results. A comparative study of the UV spectra of water-alcohol extracts from the leaves of quivering poplar and rutin solution showed that in both cases there is a bathochromic shift in the long-wavelength region of the UV spectra in the presence of aluminum chloride (AlCl3) at a wavelength of 414 ± 2 nm, which is characteristic of rutin. The developed method is based on the flavonoid complexation reaction with AlCl3 using rutin as a reference standard and an analytical wavelength of 414 nm. For the quantitative determination of flavonoid compounds, optimal extraction parameters were determined: 70% ethanol was used as the extractant, the ratio "raw material: extractant" was 1:50, the extraction duration was 60 minutes when heated in a water bath with reflux, the optimal size of the crushed raw material for more complete extraction is 1 mm.
Conclusions. It was determined that the content of the sum of flavonoids in terms of rutin in the leaves of quivering poplar collected in the Samara region varies from 1.38%± 0.05% to 2.98%± 0.05%. Single determination error with 95% confidence is ± 2.74%.
Full Text
ВВЕДЕНИЕ
Растения рода Тополь (Populus L.) семейства Ивовые (Salicaceae) являются перспективными для получения биологически активных веществ, препараты на основе которых обладают выраженной противомикробной, антиоксидантной и нефропротекторной активностью, а также противогрибковым, противовоспалительным, антисептическим и ранозаживляющим действием1,2,3,4 [1-3]. Лечебные свойства тополя обусловлены комплексом биологически активных соединений, одними из которых являются фенольные соединения, в том числе флавоноиды, фенилпропаноиды, простые фенолы, фенологликозиды [4-7]. Однако химический состав некоторых видов рода Тополь не изучен в полной мере. Всё вышеперечисленное является предпосылкой для детального изучения тополя дрожащего (Populus tremula L.) для оценки перспективы применениях его в качестве новых видов лекарственного растительного сырья (ЛРС), а также внедрение в использование функциональных продуктах здорового питания на основе сырья тополя дрожащего (Populus tremula L.) в качестве части комплексной терапии и профилактики ряда заболеваний [2, 8].
На сегодняшний день в России официнальными считаются почки 5 видов растений рода Тополь, не все из которых обладают большой сырьевой базой на территории нашей страны5. По этой причине важным является изучение химического состава и определение возможных полезных фармакологических свойств сырья широко распространенных фармакопейных и нефармакопейных видов рода Тополь.
Тополь дрожащий (Populus tremula L.) - наиболее часто встречающийся на территории России вид с широким ареалом обитания, обладающий высокой экологической значимостью. Этот вид Тополя редко используют в медицине, несмотря на широкое распространение и возможность заготовки сырья в больших объёмах. Ученые из Китая активно ведут исследования по генетическому разнообразию тополя дрожащего (Populus tremula L.) в провинции Синьцзян (Китай) [9], на территории России также проводятся исследования в данной области [10, 11], что только подтверждает необходимость в стандартизации данного вида. Сырьё тополя дрожащего (Populus tremula L.) представлено корой, листьями, почками, цветками. Исходя из результатов проверенных исследований различных видов Тополя (тополь чёрный (Populus nigra L.), тополь белый (Populus alba L.)), можно сделать вывод о том, что близкородственные виды могут иметь сходный химический состав и фармакологическую активность. Листья представляю особый интерес как источник сырья в связи с быстрой возобновляемостью ресурса без потери основного дерева [12, 13]. Использование данного сырья для производства лекарственных препаратов ограничено отсутствием нормативной документации, поэтому необходима разработка фармакопейной статьи на данное сырье, ключевым элементом которой является количественное определение действующих веществ в сырье. Согласно литературным данным имеются методики количественного определения суммы флавоноидов в сырье Populus tremula L.6 [14, 15]. В описанных методиках [14, 15] параметры не в полной мере обеспечивают максимальный выход флавоноидов, за счет выбора концентраций экстрагента этилового спирта, из сырья, произрастающего на территории Приволжского федерального округа, а также недостаточно обоснован подход пересчета суммы флавоноидов на гиперозид. Гиперозид не является доминирующим флавоноидом и, на наш взгляд, существенно не вносит вклад в спектральные характеристики. Кроме того, при разработке методики количественного определения суммы флавоноидов в листьях осины необходимо принимать во внимание фактор, учитывающий особенности местных почвенно-климатических условий ареала данного растения. Методика количественного определения содержания рутина в осине обыкновенной2 описана для коры осины обыкновенной, что также диктует необходимость совершенствования методики количественного определения суммы флавоноидов для листьев осины обыкновенной.
Цель
Разработка методики количественного определения суммы флавоноидов в листьях тополя дрожащего.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Для разработки методики применяли листья тополя дрожащего, собранные в Ботаническом саду Самарского университета, а также листья, собранные в п.г.т. Алексеевке в июне – сентябре 2025 года. Сушку растительного сырья проводили в естественных условиях при комнатной температуре, без воздействия прямого солнечного света.
Методом ТСХ изучен качественный состав флавоноидной фракции листьев тополя дрожащего при различных концентрациях этилового спирта 40-96% в системе растворителей хлороформ : этанол : вода (25:18:2) с детекцией после обработки 3 % раствором AlCl3 в УФ-свете при длине волны 365 нм.
В качестве метода исследования использована прямая и дифференциальная спектрофотометрия в соответствии ОФС.1.2.1.1.0003.15 «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях» ГФ РФ XV издания7. Спектральные характеристики водно-спиртовых извлечений оценивали на спектрофотометре Specord 40 (AnalytikJena AG, Германия) в диапазоне длин волн 190-500 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Проведенные исследования ТСХ-анализа подтвердили наличие в анализируемом сырье флавоноидов рутина и гиперозида, что согласовывалось с данными, приведенными в работе [4] (рисунок 1).
|
Рисунок 1. Хроматограммы водно-спиртовых и спиртовых экстрактов из листьев тополя дрожащего: настойка на 70% этиловом спирте (1), экстракт 40% этиловым спиртом (2-4), экстракт 70% этиловым спиртом (5-7), экстракт 96% этиловым спиртом (8), СО рутина (9), СО гиперозида (10). Figure 1. Chromatograms of water-alcohol and alcohol extracts from leaves of Populus tremula L.: tincture on 70% ethyl alcohol (1), extract with 40% ethyl alcohol (2-4), extract with 70% ethyl alcohol (5-7), extract with 96% ethyl alcohol (8), rutin (9), hyperoside (10). |
Сравнительное изучение УФ-спектров водно-спиртовых извлечений из листьев тополя дрожащего и водно-спиртового раствора рутина (рисунки 2-5) показало, что в обоих случаях наблюдается батохромный сдвиг в длинноволновой области УФ-спектров в присутствии AlCl3 при 414 ±2 нм, что характерно для рутина [16, 17]. В соответствии с этим разработанная методика основана на реакции комплексообразования флавоноидов с AlCl3 с использованием в качестве стандартного образца (СО) рутина и аналитической длины волны 414 нм.
|
|
Рисунок 2. УФ-спектры раствора водно-спиртового извлечения из листьев тополя дрожащего (1) и раствора водно-спиртового извлечения из листьев тополя дрожащего с добавлением алюминия хлорида (2) Figure 2. UV spectra of a solution of water-alcohol extraction from the leaves of the Populus tremula L. (1) and a solution of water-alcohol extraction from the leaves of the Populus tremula L. with the addition of aluminum chloride (2) | Рисунок 3. УФ-спектр раствора водно-спиртового извлечения из листьев тополя дрожащего (дифференциальный спектр) Figure 3. UV spectrum of an aqueous-alcohol extract of the leaves of the Populus tremula L. (differential spectrum) |
|
|
Рисунок 4. УФ-спектры раствора рутина (1) и раствора рутина с добавлением алюминия хлорида (2) Figure 4. UV spectra of rutin solution (1) and rutin solution with the addition of aluminum chloride solution (2) | Рисунок 5. УФ-спектр раствора рутина (дифференциальный спектр) Figure 5. UV spectrum of rutin solution (differential spectrum) |
В УФ-спектре водно-спиртового извлечения из листьев тополя дрожащего в дифференциальном варианте обнаруживается максимум поглощения при длине волны 414 нм (рисунок 5), который совпадает с максимумом поглощения водно-спиртового раствора рутина (рисунок 3). Для количественного определения флавоноидных соединений были определены оптимальные условия экстракции: в качестве экстрагента использовали 70% этанол, соотношение «сырье: экстрагент» составило 1:50, степень измельчения 1 мм, продолжительность экстракции – 60 мин при нагревании на водяной бане с обратным холодильником (таблица 1).
Ранее проводились исследования химического состава биологически активных веществ (БАВ) листьев осины, заготовленных на территории Западной Сибири, по результатам которых разработан проект ФСП: «Листья осины обыкновенной», где приведена методика количественного определения содержания флавоноидов в листьях осины обыкновенной, вошедшая в диссертационную работу [14]. Различие разработанной нами методики определения количественного содержания флавоноидов от предложенной ранее, заключается в установлении наличия рутина, как основного флавоноида для пересчета суммы флавоноидов. Обоснованием для выбора рутина, как флавоноида для пересчета, является проведенные ТСХ-анализ (рисунок 1), прямая и дифференциальная спектрофотометрия (рисунок 2-5), где доказано его наличие и количественное преобладание над гиперозидом в листьях тополя дрожащего. Еще одним существенным отличием методики выступает концентрация экстрагента. В диссертационной работе [14] выбран в качестве оптимального экстрагента этиловый спирт 40%, однако по итогам наших исследований данный экстрагент в предложенной концентрации на 32± 0,05% меньше обеспечивает экстракцию флавоноидов (таблица 1).
№ | Экстрагент | Соотношение «сырье- экстрагент» | Время экстракции, мин | Степень измельчения, мм | Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье (в %) | |||||
Экстрагент | ||||||||||
1. | этиловый спирт 40% | 1:50 | 60 | 1 | 1,29 ± 0,04% | |||||
2. | этиловый спирт 50% | 1,21 ± 0,05% | ||||||||
3. | этиловый спирт 60% | 1,19 ± 0,05% | ||||||||
4. | этиловый спирт 70% | 1,87± 0,04% | ||||||||
5. | этиловый спирт 80% | 1,47 ± 0,05% | ||||||||
этиловый спирт 90% | 1,13 ± 0,04% | |||||||||
этиловый спирт 96% | 0,79 ± 0,05% | |||||||||
Время экстракции | ||||||||||
70 % этиловый спирт | 1:50 | 30 | 1 | 1,32 ± 0,04% | ||||||
9. | 45 | 1,53 ± 0,05% | ||||||||
10. | 60 | 1,68 ± 0,05% | ||||||||
11. | 90 | 1,29 ± 0,05% | ||||||||
12. | 120 | 1,29 ± 0,04% | ||||||||
Степень измельчения | ||||||||||
13. | 70 % этиловый спирт | 1:50 | 60 | 1 | 1,88 ± 0,05% | |||||
14. | 2 | 1,47 ± 0,05% | ||||||||
15. | 3 | 1,46 ± 0,05% | ||||||||
16. | 5 | 1,12 ± 0,04% | ||||||||
Соотношение «сырье-экстрагент» | ||||||||||
17. | 70 % этиловый спирт | 1:30 | 60 | 1 | 1,63 ± 0,05% | |||||
18. | 1:50 | 1,88 ± 0,04% | ||||||||
19. | 1:100 | 1,86 ± 0,04% | ||||||||
Таблица 1. Влияние различных факторов на полноту извлечения флавоноидов из листьев тополя дрожащего
Table 1. The influence of various factors on the completeness of extraction of flavonoids from the leaves of the Populus tremula L.
Методика количественного определения суммы флавоноидов в листьях тополя дрожащего.
Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. Около 1 г измельченного сырья (точная навеска) помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл 70% этилового спирта. Колбу закрывают пробкой и взвешивают на тарированных весах с точностью до ±0,01. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане (умеренное кипение) в течение 60 мин. Затем ее охлаждают в течение 30 мин, закрывают той же пробкой, снова взвешивают и восполняют недостающий экстрагент до первоначальной массы. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр (красная полоса). Испытуемый раствор готовят следующим образом: 2 мл полученного извлечения помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 2 мл 3% спиртового раствора алюминия хлорида и доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96 % (испытуемый раствор А). Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре при длине волны 414 нм через 40 мин после приготовления. В качестве раствора сравнения раствор, используют раствор, полученный следующим образом: 2 мл извлечения (1:50) помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем раствора спиртом этиловым 96% до метки.
Приготовление раствора стандартного образца рутина.
Около 0,0054 г (точная навеска) рутина помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяют в 10 мл 70% этилового спирта при нагревании на водяной бане. После охлаждения содержимого колбы до комнатной температуры доводят объем раствора 70% этиловым спиртом до метки (раствор А рутин). 2 мл раствора А рутина помещают в мерную колбу на 25 мл, прибавляют 2 мл 3% спиртового раствора алюминия хлорида и доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96 % (испытуемый раствор Б рутина). Раствор сравнения готовят следующим образом: 2 мл раствора А рутина помещают в мерную колбу на 25 мл и доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96 % (раствор сравнения Б рутина). Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:
где A – оптическая плотность испытуемого раствора; Do – оптическая плотность раствора СО рутина; m – масса сырья, г; mо – масса СО рутина, г; W – потеря в массе при высушивании, %.
В случае отсутствия СО рутина целесообразно использовать рассчитанное значение удельного показателя поглощения при 414 нм – 240 [17].
,
где A – оптическая плотность испытуемого раствора; m – масса сырья, г; 240 – удельный показатель поглощения (E ) СО рутина при 414 нм; W – потеря в массе при высушивании, %.
Критерием оценки аналитической методики является валидационная оценка. Валидацию методики проводили в соответствии с ГФ РФ XV издания8.
Валидационная оценка разработанной методики проводилась по показателям: специфичность, линейность, правильность.
Специфичность методики определялась по соответствию максимумов поглощения комплекса флавоноидов листьев тополя дрожащего и раствора СО рутина с алюминием хлоридом (дифференциальный вариант), (рисунки 3 и 5).
Линейность методики определяли для серии извлечений листьев тополя дрожащего (с концентрациями в диапазоне от 4,32 до 43,2 мкг/мл) с алюминием хлоридом при длине волны 414 нм. На основании полученных данных строили график зависимости значений оптической плотности растворов извлечений листьев тополя дрожащего с алюминием хлоридом от концентрации и затем рассчитывали уравнение линейной регрессии (рисунок 6; таблица 2).
При изучении линейной зависимости вида y = bx + a, коэффициент корреляции составил 1, следовательно, данную методику можно использовать для анализа суммы флавоноидов в листьях тополя дрожащего в пересчете на рутин в указанном диапазоне концентраций (рисунок 6; таблица 2).
№ п/п | Концентрация стандартного образца рутина, мкг/мл | Значение оптической плотности, е.о.п. (среднее значение из трех последовательных измерений) |
1 | 4,32 | 0,1828 |
2 | 8,64 | 0,4000 |
3 | 17,28 | 0,7943 |
4 | 43,2 | 2,0585 |
Таблица 2. Исходные данные для оценки линейности методики
Table 2. Initial data for assessing the linearity of the methodology
|
Рисунок 6. Зависимость значений оптической плотности извлечения листьев тополя дрожащего с алюминия хлоридом от концентрации (дифференциальный вариант) Figure 6. Dependence of the optical density values of the leaves of the Populus tremula L. extraction with aluminum chloride on concentration (differential version) |
Метрологические характеристики методик количественного определения содержания суммы флавоноидов в водно-спиртовом извлечении листьев тополя дрожащего представлены в таблице 3. Ошибка единичного определения суммы флавоноидов в листьях тополя дрожащего с доверительной вероятностью 95% составляет ± 2,74% (таблица 3).
n | f | ,% | S2 | S |
| P, % | t (P, f) | ±∆X | ±∆ | E, % | , % |
11 | 10 | 1,84 | 0,0056 | 0,0750 | 0,0226 | 95 | 2,23 | 0,17 | 0,05 | 2,74 | 9,10 |
Таблица 3. Результаты оценки прецизионности методики количественного определения суммы флавоноидов в листьях тополя дрожащего (уровень повторяемости)
Table 3. Results of the precision assessment of the method for quantifying the sum of flavonoids in the leaves of the Populus tremula L. (repeatability level)
Таким образом, исходя из данных валидационной оценки эксперимента, можно сделать вывод о пригодности использования данной методики для количественной оценки суммы флавоноидов в пересчете на рутин.
С использованием этой методики было проанализировано восемь образцов листьев тополя дрожащего, заготовленные в июне - сентябре 2025 года. Определено, что содержание суммы флавоноидов в анализируемых образцах, собранных в Самарской области, варьирует от 1,38%±0,05% до 2,98%±0,05% в зависимости от времени и места сбора сырья (таблица 4). На наш взгляд, для обоснования числового показателя – суммы флавоноидов в листьях тополя дрожащего целесообразно проведение дальнейших исследований на примере образцов, собранных в разный период вегетации, а также сырья из других регионов Российской Федерации.
№ | Характеристика образца сырья | Содержание суммы флавоноидов в абсолютно сухом сырье (в %) в пересчете на рутин |
1. | Тополя дрожащего листья (июнь, п.г.т. Алексеевка) | 1,38±0,05% |
2. | Тополя дрожащего листья (июнь, Ботанический сад) | 1,43±0,05% |
3. | Тополя дрожащего листья (июль, п.г.т. Алексеевка) | 1,44±0,05% |
4. | Тополя дрожащего листья (июль, Ботанический сад) | 1,47±0,05% |
5. | Тополя дрожащего листья (август, п.г.т. Алексеевка) | 1,68±0,05% |
6. | Тополя дрожащего листья (август, Ботанический сад) | 1,88±0,05% |
7. | Тополя дрожащего листья (сентябрь, п.г.т. Алексеевка) | 2,26±0,05% |
8. | Тополя дрожащего листья (сентябрь, Ботанический сад) | 2,98±0,05% |
Таблица 4. Содержание суммы флавоноидов в образцах листьев тополя дрожащего (в %) в пересчете на рутин
Table 4. Content of the sum of flavonoids in samples of the leaves of the Populus tremula L. (in %) calcuted on rutin
Выводы
Таким образом, в результате проведенного исследования разработана методика количественного анализа суммы флавоноидов в листьях тополя дрожащего с использованием СО рутина при аналитической длине волне 414 нм. Определено, что содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин в листьях тополя дрожащего, собранных в Самарской области, варьируется от 1,38%±0,05% до 2,98%±0,05%. Ошибка единичного определения с доверительной вероятностью 95% составляет ± 2,74%.
Проведена валидационная оценка разработанной методики по показателям специфичность, линейность в соответствии с ГФ РФ XV издания9. Исходя из результатов валидационной оценки результатов эксперимента, можно сделать заключение о пригодности использования данной методики для количественной оценки суммы флавоноидов в пересчете на рутин в листьях тополя дрожащего.
Полученные результаты исследования могут быть использованы при разработке нормативной документации на перспективный вид лекарственного растительного сырья «Тополя дрожащего листья» для внедрения в Государственную фармакопею Российской Федерации.
About the authors
Ekaterina Mikhailovna Ushakova
Самарский государственный медицинский университет
Author for correspondence.
Email: e.m.ushakova@samsmu.ru
Russian Federation
Vladimir Alexandrovich Kurkin
Samara State Medical University
Email: v.a.kurkin@samsmu.ru
ORCID iD: 0000-0002-7513-9352
SPIN-code: 1974-5537
Head of the Department of Pharmacognosy with Botany and the Basics of Phytotherapy, Doctor of Pharmaceutical Sciences, Professor
Russian Federation, Chapaevskaya str., 89, Samara, 443099Vitaly Mikhailovich Ryzhov
Samara State Medical University
Email: v.m.ryzhov@samsmu.ru
ORCID iD: 0000-0002-8399-9328
SPIN-code: 4522-4652
Candidate of Pharmaceutical Sciences, Associate Professor, Associate Professor of the Department of Pharmacognosy with Botany and the Basics of Phytotherapy
Russian Federation, Chapaevskaya str., 89, Samara, 443099References
- Turetskova, V.F. Theoretical and experimental justification of the rational use of bark and shoots of buckthorn sea buckthorn and aspen: specialty 14.04.00 "Pharmaceutical Sciences": dissertation for the degree of Doctor of Pharmaceutical Sciences/V.F. Turetskova. Perm, 2001. – 319. URL: https://rusneb.ru/catalog/000200_000018_RU_NLR_bibl_490071/ .
- Neacsu M., Micol V., Perez-Fons L. et al. A novel antioxidant phenyl disaccharide from Populus tremula knotwood. Molecules. 2019;12(2):205–217. doi: 10.3390/12020205.
- Martynov A.M., Tokareva M.N., Chuparina E.V. Phenolic compounds and elemental composition of the buds of common aspen (Populus trémula L.). Siberian Medical Journal. 2011;105(6):235–236. URL: https://elibrary.ru/item.asp?id=17053578.
- Lobanova I.Yu., Turetkova V.F. Isolation and study of the composition of flavonoids of common aspen leaves. Chemistry of plant materials. 2011;2:117-122. URL: https://elibrary.ru/item.asp?id=16754577.
- Prokusheva D.L., Velichko V.V., Kruglov D.S., et al. Dynamics of accumulation of biologically active compounds in common aspen raw materials. News of SSTU. Medicine, pharmacy. 2024;1:28-33. doi: 10.51620/2687-1521-2024-1-17-28-33.
- Lobanova, I.Yu., Turetkova V.F., Kudrikova L.E. Study of the composition of phenolic compounds of aqueous extracts from the leaves of common aspen. Medicine in Kuzbass. 2009;8-7:54-56. URL: https://elibrary.ru/item.asp?id=27216875.
- Kirpichenok, A.M., Shevchenko N.A. Screening of biologically active substances of common aspen bark Populus tremula L. (Report 2). Topical issues of modern medicine and pharmacy: materials of the 77th International Scientific and Practical Conference of Students and Young Scientists. Vitebsk. 2025:110. URL: https://elibrary.ru/item.asp?id=83011320.
- Talykova N.M., Ekshibarova O.A. Production, analysis and establishment of antioxidant activity of decoction, tinctures and liquid extract from common aspen bark. Modern science-intensive technologies. 2004;6:117-118. URL: https://elibrary.ru/item.asp?id=9938623.
- Du S.H, Wang Z.S., Baoerjiang A., et. al. A study on genetic diversity of Populus tremula in China by single-copy nuclear markers. Forest Research. 2016;29(1):48-52. URL: https://www.aeeisp.com/lykxyj/en/article/id/895df363-4e6a-456d-abe9-8ac223d84492
- Garipov N.R. Selection and cultivation of triploid aspen (Populus tremula L.) using methods of molecular genetics and biotechnology in the Republic of Tatarstan: specialty 06.03.01 "Forest crops, selection, seed production": abstract of the dissertation for the degree of candidate of agricultural sciences. Pushkino. 2014:24. URL: https://elibrary.ru/item.asp?id=30406051
- Lebedeva M.V. Molecular genetic approaches in poplar breeding (Populus ssp.) In the North-West of the Russian Federation: dissertation for the degree of candidate of biological sciences. St. Petersburg. 2022:123. URL: https://elibrary.ru/item.asp?id=54423245.
- Shcherban V.A. Osina in the North-West Caucasus: specialty 06.03.03 "Agroforestry, protective afforestation and landscaping of settlements, forest fires and combating them": dissertation for the degree of candidate of agricultural sciences. Maykop. 2000:122. URL: https://elibrary.ru/item.asp?id=19161718.
- Yamalieva L.D., Afonina E.A. Assessment of the state of landscaping in Elabuga (using the example of the poplar genus). Successes of modern natural science. 2014;8:57-58. URL: https://elibrary.ru/item.asp?id=21586181.
- Lobanova I.Yu. Phytochemical and technological study of common aspen leaves: abstract dis.... Candidate of Pharmaceutical Sciences: 14.04.01, 14.04.02. Perm. 2012:26. URL: https://rusneb.ru/catalog/000199_000009_005019389/
- Barinova N.S., Isaeva E.V. Determination of flavonoids in extracts of aspen leaves of the Krasnoyarsk Territory. Scientific creativity of youth - the forest complex of Russia: materials of the XXI All-Russian (national) scientific and technical conference. Yekaterinburg. 2025:65-68. URL: https://elibrary.ru/item.asp?id=82358635.
- Kurkin VA. Pharmacognosy. 6th edition, Samara: LLC "Printing association "Standard", FGOU HE SamSMU of the Ministry of Health of Russia, 2024:1268. (In Russ.). URL: https://elibrary.ru/item.asp?id=79697561.
- Kupriyanova EA, Kurkin VA. Development of approaches to standardization of black poplar leaves. Postgraduate Bulletin of the Volga region. 2018;5–6:17–21. (In Russ.).doi: 10.17816/2072-2354.2018.18.3.17-21.
Supplementary files
