КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ ДУБИЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ В ПОДЗЕМНЫХ ОРГАНАХ POTENTILLA ERECTA L. В ПЕРЕСЧЕТЕ НА КАТЕХИН

Аннотация

Проведен количественный анализ дубильных веществ, содержащихся в подземных органах лапчатки прямостоячей, в пересчете на катехин. Оценена возможность использования данного метода для анализа названного сырья.

Полный текст

Дубильные вещества - это высокомолекулярные фенольные соединения, широко встречающиеся в природе и обладающие фармакологической активностью (противовоспалительным и антибактериальным действием) [2]. Несмотря на то, что лекарственное растительное сырье (ЛРС), содержащее дубильные вещества, широко используется в фармацевтической практике, проблемы стандартизации данной группы биологически активных соединений (БАС) до сих пор в полной мере не решены. Согласно Государственной фармакопее (ГФ) Российской Федерации XIII издания, для количественного анализа дубильных веществ указаны следующие методы: перманганатометрия и спектрофотометрия в пересчете на пирогаллол [1]. В литературе имеются данные об определении дубильных веществ методом спектрофотометрии с использованием раствора стандартного образца танина, а также разработана методика с пересчетом на катехин для сабельника болотного и коричника китайского [3, 4, 5, 6]. На наш взгляд, использование стандартных образцов из группы гидролизуемых танинов (пирогаллола, танина) не является оптимальным подходом к анализу лекарственного растительного сырья, содержащего преимущественно конденсированные дубильные вещества, - дуб обыкновенный, черника обыкновенная, представители рода лапчатка и др. [2, 7]. Таким образом, мы считаем, что для стандартизации ЛРС вышеперечисленных растений целесообразно использовать методику, позволяющую проводить расчет на вещество конденсированной природы, в частности, катехин [4, 6]. Цель исследования: определение количественного содержания дубильных веществ в подземных органах лапчатки прямостоячей в пересчете на катехин и оценка возможности использования данного метода для анализа изучаемого рода. Материалы и методы Объектами исследования послужили промышленные образцы корневищ лапчатки прямостоячей (ООО «Лекра-сэт», г. Барнаул). Для приготовления извлечения брали 1 г измельченного сырья (точная навеска) с размером частиц до 3 мм, помещали в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляли 50 мл 40%, 50% и 70%-го спирта этилового. Колбу закрывали пробкой, взвешивали и присоединяли к обратному холодильнику. Нагревали на кипящей водяной бане в течение 1 часа. Затем колбу охлаждали в течение 30 минут и доводили экстрагентом до исходной массы. Извлечение фильтровали через бумажный фильтр. Для соблюдения условий методики, разработанной для коричника китайского и сабельника болотного, в количественном анализе при использовании этилового спирта в концентрации 50% осуществляли измерение оптической плотности в подкисленном 50%-м этиловом спирте. Для его приготовления в мерную колбу вместимостью 100 мл помещали 20 мл 50%-го этилового спирта и 1 мл 1%-го раствора хлористоводородной кислоты, перемешивали, доводили до метки спиртом этиловым 50% и снова перемешивали. Использование спирта подкисленного позволяет подавить ионизацию фенольных гидроксилов и достичь определенного значения рH [4]. Количественную оценку содержания дубильных веществ проводили с использованием метода спектрофотометрии на приборе «Specord 40» (Analytik Jena). Результаты исследования Для количественного анализа брали 1 мл полученного извлечения, переносили в мерную колбу на 50 мл и в зависимости от использованного экстрагента доводили до метки 40%, 50% (подкисленным) или 70%-м этиловым спиртом соответственно (раствор А). Затем 1 мл раствора А переносили в мерную колбу на 50 мл и доводили до метки (раствор Б). Измеряли оптическую плотность полученного раствора Б при длине волны 279 нм. Содержание суммы дубильных веществ в лекарственном растительном сырье в процентах рассчитывали по формуле: missing image filemissing image file, где Dx - оптическая плотность испытуемого раствора; mx - навеска сырья, г; 2500 - разведение, мл; 144 - коэффициент удельного поглощения катехина [6]. Внешний вид кривой поглощения для извлечения из подземных органов лапчатки прямостоячей представлен на рисунке 1. Количественное содержание дубильных веществ в пересчете на катехин варьировало от 26,2±0,6% до 28,5±0,5% (таблица 1). Таблица 1 Результаты количественного анализа подземных органов лапчатки прямостоячей (Potentilla erecta L.) Экстрагент 40% этиловый спирт 50% этиловый спирт [6] 70% этиловый спирт 26,2±0,6% 28,5±0,5% 26,7±0,6% Из таблицы 1 видно, что нет существенных различий в расчетном содержании дубильных веществ при экстракции спиртом этиловым разных концентраций и использовании подкисленного и неподкисленного спирта этилового для измерения оптической плотности. Кроме того, 70%-й этиловый спирт является также оптимальным экстрагентом для флавоноидных структур. Следовательно, данная методика может быть использована и для расчета содержания флавоноидов в сырье. На наш взгляд, для оценки качества сырья лапчатки прямостоячей целесообразнее использовать показатель «дубильные вещества в пересчете на катехин», чем «дубильные вещества в пересчете на танин». Таким образом, можно рекомендовать данный метод для анализа сырья лапчатки прямостоячей, так как полученные результаты соответствуют пределу содержания дубильных веществ, указанному в фармакопейной статье - не менее 20%. Заключение Таким образом, определено количественное содержание дубильных веществ в пересчете на катехин в подземных органах лапчатки прямостоячей. Установлено, что использование в качестве экстрагента спирта этилового 40%-го или 70%-го (вместо 50%-го, указанного в методике) не оказывает значительного влияния на результаты количественного определения дубильных веществ в пересчете на катехин. Кроме того, полученные результаты соотносятся с требованиями ГФ РФ XIII по содержанию дубильных веществ - «дубильные вещества в пересчете на танин - не менее 20%». Следовательно, качество сырья можно оценивать, используя менее трудоемкий метод в пересчете на катехин.