Фитохимическое исследование листьев представителей рода сирень (Syringa L.)

Полный текст

Введение

В качестве лекарственного растительного сырья (ЛРС) зарегистрирована кора сирени обыкновенной (ВФС 42-2106-92). Препараты на основе коры сирени обладают широким спектром фармакологической активности: иммуномодулирующим, адаптогенным, анксиолитическим и антидепрессивным действием [2, 4, 6]. Кора сирени обыкновенной является источником получения государственного стандартного образца (ГСО) cирингина, или элеутерозида В (ВФС 42-2088-92 «Cирингин-стандартный образец»), который применяется в целях стандартизации сырья и препаратов элеутерококка колючего (Eleutherococcus senticosus Rupr. et Maxim) [1–4]. В коре сирени обыкновенной также было доказано наличие других фенилпропаноидов (кониферин, актеозид, форзитиазид), фенольных соединений (тирозол, гидрокситирозол, салидрозид) и иридоидов (олеуропеин) [2, 4]. Разработаны методики качественного и количественного анализа сырья «Сирени обыкновенной кора», а также препаратов «Сирени настойка» и «Сирени сироп» с использованием ГСО сирингина методами тонкослойной хроматографии, прямой спектрофотометрии и высокоэффективной жидкостной хроматографии [2–6]. Не менее интересными с точки зрения источника биологически активных соединений (БАС) являются листья сирени обыкновенной, в которых содержатся флавоноиды и маннит [7, 8]. Ранее нами была разработана методика количественного определения флавоноидов в листьях сирени обыкновенной [8, 9]. Принимая во внимание то обстоятельство, что в народной медицине листья сирени применяются в качестве противовоспалительного и антибактериального средства, представляется актуальным проведение сравнительного спектрофотометрического исследования листьев с. обыкновенной, с. венгерской, с. амурской, с. мелколистной, с. волосистой и с. Звегинцева [9].

Цель работы — сравнительное исследование флавоноидного состава листьев представителей рода Сирень.

В задачи исследования входило:

• отбор исследуемых образцов сырья;
• определение содержания суммы флавоноидов в исследуемых образцах сырья;
• определение наиболее перспективных видов сирени с точки зрения содержания флавоноидов.

Результаты и их обсуждение

Род Сирень (Syringa L.) насчитывает около 30 видов, широко культивируемых в Европе, Азии и странах СНГ [2].

Особый интерес, наряду с фармакопейным видом — сиренью обыкновенной, представляют листья и других видов рода Сирень, содержащие флавоноиды.

Объектом исследования служили листья с. обыкновенной, с. венгерской, с. амурской, с. мелколистной, с. волосистой и с. Звегинцева, заготовленные в мае 2021 г. в Ботаническом саду Самарcкого университета.

Определено, что в ультрафиолетовых (УФ) спектрах водно-спиртового извлечения листьев сирени наблюдается батохромный сдвиг длинноволновой полосы флавоноидов (рис. 1–12), как и в случае рутина (рис. 13, 14). Изучение УФ-спектров ГСО рутина показало, что раствор данного стандарта в присутствии алюминия хлорида имеет максимум поглощения при длине волны 412 нм (рис. 13). В УФ-спектрах водно-спиртовых извлечений из листьев сирени в дифференциальном варианте максимум поглощения обнаруживается также при длине волны 412 нм (рис. 1–12), который соответствует максимуму поглощения раствора рутина (рис. 13, 14).

 

Рис. 1. Электронные спектры растворов водно-спиртового извлечения из листьев сирени обыкновенной: 1 — раствор извлечения; 2 — раствор извлечения с добавлением алюминия хлорида / Fig. 1. Electronic spectra of the solutions of the water-alcohol extraction from Syringa vulgaris leaves: 1 — extraction solution; 2 — extraction solution with the addition of aluminum chloride

 

Рис. 2. Электронный спектр раствора водно-спиртового извлечения из листьев сирени обыкновенной (дифференциальный вариант) / Fig. 2. The electronic spectrum of the solution of the water-alcohol extraction from the leaves of Syringa vulgaris (differential version)

 

Рис. 3. Электронные спектры растворов водно-спиртового извлечения из листьев сирени венгерской: 1 — раствор извлечения; 2 — раствор извлечения с добавлением алюминия хлорида / Fig. 3. Electronic spectra of the solutions of the water-alcohol extraction from Syringa josikaea leaves: 1 — extraction solution; 2 — extraction solution with the addition of aluminum chloride

 

Рис. 4. Электронный спектр раствора водно-спиртового извлечения из листьев сирени венгерской (дифференциальный вариант) / Fig. 4. The electronic spectrum of the solution of the water-alcohol extraction from the leaves of Syringa josikaea (differential version)

 

Рис. 5. Электронные спектры растворов водно-спиртового извлечения из листьев сирени амурской: 1 — раствор извлечения; 2 — раствор извлечения с добавлением алюминия хлорида / Fig. 5. Electronic spectra of the solutions of the water-alcohol extraction from Syringa amurensis leaves: 1 — extraction solution; 2 — extraction solution with the addition of aluminum chloride

 

Рис. 6. Электронный спектр раствора водно-спиртового извлечения из листьев сирени амурской (дифференциальный вариант) / Fig. 6. The electronic spectrum of the solution of the water-alcohol extraction from the leaves of Syringa amurensis (differential version)

 

Рис. 7. Электронные спектры растворов водно-спиртового извлечения из листьев сирени мелколистной: 1 — раствор извлечения; 2 — раствор извлечения с добавлением алюминия хлорида / Fig. 7. Electronic spectra of the solutions of the water-alcohol extraction from Syringa microphylla leaves: 1 — extraction solution; 2 — extraction solution with the addition of aluminum chloride

 

Рис. 8. Электронный спектр раствора водно-спиртового извлечения из листьев сирени мелколистной (дифференциальный вариант) / Fig. 8. The electronic spectrum of the solution of the water-alcohol extraction from the leaves of Syringa microphylla (differential version)

 

Рис. 9. Электронные спектры растворов водно-спиртового извлечения из листьев сирени волосистой: 1 — раствор извлечения; 2 — раствор извлечения с добавлением алюминия хлорида / Fig. 9. Electronic spectra of the solutions of the water-alcohol extraction from Syringa villosa leaves: 1 — extraction solution; 2 — extraction solution with the addition of aluminum chloride

 

Рис. 10. Электронный спектр раствора водно-спиртового извлечения из листьев сирени волосистой (дифференциальный вариант) / Fig. 10. The electronic spectrum of the solution of the water-alcohol extraction from the leaves of Syringa villosa (differential version)

 

Рис. 11. Электронные спектры растворов водно-спиртового извлечения из листьев сирени Звегинцева: 1 — раствор извлечения; 2 — раствор извлечения с добавлением алюминия хлорида / Fig. 11. Electronic spectra of the solutions of the water-alcohol extraction from Syringa sweginzowii leaves: 1 — extraction solution; 2 — extraction solution with the addition of aluminum chloride

 

Рис. 12. Электронный спектр раствора водно-спиртового извлечения из листьев сирени Звегинцева (дифференциальный вариант) / Fig. 12. The electronic spectrum of the solution of the water-alcohol extraction from the leaves of Syringa sweginzowii (differential version)

 

Рис. 13. Электронные спектры спиртовых растворов рутина: 1 — исходный раствор; 2 — раствор с добавлением алюминия хлорида / Fig. 13. Electronic spectra of the alcohol solutions of rutin: 1 — extraction solution; 2 — extraction solution with the addition of aluminum chloride

 

Рис. 14. Электронный спектр спиртового раствора рутина (дифференциальный вариант) / Fig. 14. Electronic spectrum of the alcohol solution of rutin (differential version)

 

Таким образом, рутин может быть использован в методике анализа в качестве ГСО.

С целью количественного определения суммы флавоноидов в листьях сирени обыкновенной нами использовались следующие оптимальные условия экстракции флавоноидов: экстрагент 70 % этиловый спирт; соотношение сырье/экстрагент 1 : 50; время экстракции — извлечение на кипящей водяной бане в течение 45 мин; степень измельчения — 1 мм.

Методика количественного определения суммы флавоноидов в листьях сирени обыкновенной. Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. Около 1 г измельченного сырья (точная навеска) помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл 70 % этилового спирта. Колбу закрывают пробкой и взвешивают на тарированных весах с точностью до ±0,01. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане (умеренное кипение) в течение 45 мин. Затем колбу охлаждают в течение 30 мин, закрывают той же пробкой, снова взвешивают и восполняют недостающий экстрагент до первоначальной массы. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр (красная полоса). Испытуемый раствор готовят следующим образом: 1 мл полученного извлечения помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 1 мл 3 % спиртового раствора алюминия хлорида и доводят объем раствора до метки 96 % этиловым спиртом (испытуемый раствор А). Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре при длине волны 412 нм через 40 мин после приготовления. В качестве раствора сравнения используют раствор, полученный следующим образом: 1 мл извлечения (1 : 50) помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем раствора 96 % этиловым спиртом до метки.

Примечание: Приготовление раствора рутина-стандартного образца. Около 0,020 г (точная навеска) рутина помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 30 мл 70 % этилового спирта при нагревании на водяной бане. После охлаждения содержимого колбы до комнатной температуры доводят объем раствора 70 % этиловым спиртом до метки (раствор А рутина). 1 мл раствора А рутина помещают в мерную колбу на 25 мл, прибавляют 1 мл 3 % спиртового раствора алюминия хлорида и доводят объем раствора до метки 96 % этиловым спиртом (испытуемый раствор Б рутина). Измеряют оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре при длине волны 412 нм. В качестве раствора сравнения используют раствор, который готовят следующим образом: 1 мл раствора А рутина помещают в мерную колбу на 25 мл и доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96 % (раствор сравнения Б рутина).

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

$X=\frac{D\cdot m_{\text{o}}\cdot 50\cdot 25\cdot 1\cdot 100\cdot 100}{D_{\text{o}}\cdot m\cdot 50\cdot 25\cdot (100-W)},$

где D — оптическая плотность испытуемого раствора; D_o — оптическая плотность раствора ГСО рутина; m — масса сырья, г; m_o — масса ГСО рутина, г; W — потеря в массе при высушивании в процентах.

В случае отсутствия стандартного образца рутина целесообразно использовать теоретическое значение удельного показателя поглощения — 240.

$X=\frac{D\cdot 50\cdot 25\cdot 100}{m\cdot 240\cdot (100-W)},$

где D — оптическая плотность испытуемого раствора; m — масса сырья, г; m_о — масса ГСО рутина, г; 240 — удельный показатель поглощения ($E_{1\text{см}}^{1\%}$) ГСО рутина при 412 нм; W — потеря в массе при высушивании в процентах.

В таблице приведены результаты расчетов по содержанию суммы флавоноидов методом дифференциальной спектрофотометрии с использованием СО рутина при аналитической длине волны 412 нм в листьях некоторых видов сиреней. Содержание суммы флавоноидов для исследуемых образцов сирени обыкновенной и с. амурской варьирует от 2,60 до 2,94 %, что соответствует нижнему пределу содержания суммы флавоноидов, определенному нами ранее (не менее 2,5 %), для исследуемых образцов с. венгерской, с. волосистой, с. мелколистной, с. Звегинцева от 1,31 до 1,78 % [8]. Следует отметить, что наибольшее содержание суммы флавоноидов обнаружено в листьях с. обыкновенной и с. амурской (см. таблицу).

 

Таблица. Содержание суммы флавоноидов в образцах листьев сирени / Table. The content of total flavonoids in samples of Syringa leaves

Характеристика образца сырья	Содержание суммы флавоноидов в пересчете на абсолютно сухое сырье и рутин, %
Листья сирени обыкновенной. Ботанический сад Самарского университета, г. Самара (май 2021 г.)	2,92 ± 0,18
Листья сирени венгерской. Ботанический сад Самарского университета, г. Самара (май 2021 г.)	1,68 ± 0,10
Листья сирени амурской. Ботанический сад Самарского университета, г. Самара (май 2021 г.)	2,60 ± 0,16
Листья сирени мелколистной. Ботанический сад Самарского университета, г. Самара (май 2021 г.)	1,43 ± 0,09
Листья сирени волосистой. Ботанический сад Самарского университета, г. Самара (май 2021 г.)	1.31 ± 0,08
Листья сирени Звегинцева. Ботанический сад Самарского университета, г. Самара (май 2021 г.)	1,73 ± 0,11

 

Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют о целесообразности использования данной методики анализа листьев сирени методом спектрофотометрии при аналитической длине волы 412 нм в пересчете на рутин.

Выводы

1. Во всех электронных спектрах исследуемых образцов при добавлении спиртового раствора AlCl₃ отмечен батохромный сдвиг длинноволновой полосы, что свидетельствует о вкладе флавоноидов в кривую поглощения УФ-спектров. В условиях дифференциальной спектрофотометрии наблюдается максимум поглощения в области 406–412 нм, что свидетельствует о целесообразности использования в методике анализа СО рутина, имеющего максимум поглощения при длине волны 412 ± 2 нм.
2. Определено, что содержание суммы флавоноидов в исследуемых образцах листьев с. обыкновенной, с. амурской, с. волосистой, с. мелколистной, с. Звегинцева и с. венгерской варьирует от 1,31 до 2,94 %.
3. Листья некоторых видов рода Syringa (с. обыкновенной, с. амурской) удовлетворяют установленным нами требованиям по содержанию суммы флавоноидов (не менее 2,5 %), являются перспективным видом ЛРС наряду с корой и могут служить источником флавоноидов и других биологически активных соединений.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Об авторах

Анастасия Дмитриевна Серебрякова

ФГБОУ ВО «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Автор, ответственный за переписку.
Email: lazymoon93@mail.ru

аспирант кафедры фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии

Россия, Самара

Владимир Александрович Куркин

ФГБОУ ВО «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Email: v.a.kurkin@samsmu.ru

доктор фармацевтических наук, профессор, заведующий кафедрой фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии

Россия, Самара

Альберт Иванович Агапов

ФГБОУ ВО «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Email: a.i.agapov@samsmu.ru

доктор биологических наук, профессор, профессор кафедры медицинской химии

Россия, Самара

Список литературы

Дополнительные файлы